ترکیبی درجا روشی برای تشخیص انحرافات کروموزومی است. این شامل برچسب گذاری خاص است کروموزوم با شکوفایی رنگ می کند و آنها را به یک پروب DNA متصل می کند. این روش برای تشخیص جهش های ژنتیکی قبل از تولد استفاده می شود.
ترکیبی درجا چیست؟
ترکیبی درجا شامل برچسب گذاری خاص است کروموزوم با شکوفایی رنگ می کند و آنها را به یک پروب DNA متصل می کند. این روش برای تشخیص قبل از تولد استفاده می شود ژن جهش ترکیبی درجا یا فلورسانس در هیبریداسیون درجا شامل تشخیص ژنتیکی مولکولی از اسیدهای نوکلئیک از RNA یا DNA در بافتهای خاص یا سلول. به طور معمول ، این نوع تشخیص برای تشخیص ناهنجاری کروموزومی ساختاری یا عددی در بارداری. برای این منظور ، از یک کاوشگر تولید شده مصنوعی استفاده می شود که خود از اسید نوکلئیک تشکیل شده است. سپس به آن متصل می شود اسیدهای نوکلئیک در ارگانیسم با جفت شدن پایه. به این اتصال با اصطلاح ترکیبی گفته می شود. تشخیص بر روی ساختار زنده بیمار انجام می شود و بنابراین با تشخیص درجا مطابقت دارد. برای تمایز از این روشهای آزمایشگاهی است که در آنها آزمایش در لوله آزمایش انجام می شود. این روش در قرن 20 توسط دانشمندان جو گال و مری لو پردو توسعه داده شد. این تکنیک از آن زمان به بعد تکامل یافته است. به عنوان مثال ، در حالی که پس از پروب های رادیواکتیو استفاده می شد ، پروب های دارای برچسب فلورسانس با پیوند کووالانسی به برچسب گذاری مولکول ها امروزه استفاده می شود
عملکرد ، اثر و اهداف
از هیبریداسیون درجا معمولاً برای تشخیص انحرافات کروموزومی ، ناهنجاری های کروموزومی استفاده می شود که در کاریوگرام قابل تشخیص نیست. بنابراین ، این روش همیشه هنگامی استفاده می شود که بیماری های ارثی در طی تعیین شود بارداری. از آنجا که انحرافات کروموزومی مشکلی است که امروزه نباید آن را دست کم گرفت ، به مرور زمان کاربرد این روش افزایش یافته است. هیبریداسیون با استفاده از سلولهای بومی مادر انجام می شود مایع آمنیوتیک. اساس این روش اتصال پروب دارای برچسب رنگ به قطعات DNA است. بعداً می توان از میکروسکوپ برای ارزیابی تعداد کپی استفاده کرد ، زیرا کپی های جداگانه یک سیگنال نوری منتشر می کنند و بنابراین می توانند زیر میکروسکوپ قابل مشاهده باشند. روشهای مختلفی برای این کار وجود دارد. در هر صورت ، تجزیه و تحلیل بلافاصله پس از اتصال انجام می شود. در این حالت ، یک رنگ فلورسانس مانند بیوتین استفاده می شود ، که مستقیماً به پروب DNA متصل می شود. در روش غیر مستقیم هیبریداسیون درجا ، تجزیه و تحلیل بلافاصله پس از هیبریداسیون انجام نمی شود زیرا مواد فلورسنت فقط پس از ترکیبی می توانند به پروب متصل شوند. این روش غیر مستقیم بیشتر از روش مستقیم مورد استفاده قرار می گیرد زیرا حساسیت بیشتری در نظر گرفته می شود. تکنیک ها شامل پروب های DNA سانترومتر مخصوص کروموزوم ، کاوشگرهای DNA ویژه لوکوس ، کاوشگرهای کتابخانه DNA اختصاصی کروموزوم و هیبریداسیون مقایسه ای ژنوم هستند. برای تشخیص ناهنجاری های عددی کروموزومی می توان از پروب های DNA سانترومر مخصوص کروموزوم استفاده کرد. یعنی در درجه اول هنگام تکثیر یا حذف استفاده می شود کروموزوم مشکوک هستند پروب های DNA ویژه لوکوس عمدتا برای تشخیص حداقل جهش هایی است که نمی توان در کاریوگرام تشخیص داد. از یک کاوشگر DNA DNA مخصوص کروموزوم به ویژه برای تشخیص درج و انتقال استفاده می شود. از طرف دیگر ، ترکیبی از ژنوم مقایسه ای تجزیه و تحلیل جامعی از تلفات و افزایش مواد کروموزومی است. امروزه هیبریداسیون درجا در تشخیص جهش های مختلف کروموزومی از اهمیت بالایی برخوردار است. در تشخیص سندرم داونبه عنوان مثال پروب ها به کروموزوم 21 متصل می شوند. برای این منظور معمولاً از کاوشگرهای مخصوص کروموزوم استفاده می شود که می تواند در موارد سو of ظن به این بیماری استفاده شود. ممکن است سو susp ظن ایجاد شود ، به عنوان مثال ، اگر والدین قبلاً کودکی مبتلا به این بیماری را به دنیا آورده باشند سونوگرافی تصویر قابل توجه است. اگر یک کراوات سه گانه وجود داشته باشد تا یک کراوات دوتایی ، و در نتیجه یک سیگنال رنگی سه گانه ایجاد شود ، تشخیص تایید شده در نظر گرفته می شود.
خطرات ، عوارض جانبی و خطرات
به عنوان مثال ، برخلاف PCR ، هیبریداسیون درجا کمتر در معرض آلودگی است. علاوه بر این ، زمان مورد نیاز برای عمل بسیار کمتر است. با این حال ، از آنجا که جنین ها به طور خاص الگوهای کروموزومی را تشکیل می دهند ، از هر الگوی موجود نمی توان برای اطمینان از بقیه کروموزومی استفاده کرد توزیع و بنابراین وضعیت ژنتیکی سلولهای دیگر. سیگنال های رنگی نیز ممکن است به دلایل دیگر همپوشانی داشته باشند یا نامرئی بمانند. بنابراین ، ترکیبی درجا به عنوان یک ابزار تشخیصی در طول بارداری نسبتاً مستعد خطا است. ممکن است تشخیص غلط رخ دهد و والدین ممکن است در مورد یک فرد سالم تصمیم بگیرند جنین. برای کاهش احتمال خطای هیبریداسیون درجا ، حداقل باید دو سلول جنینی به طور همزمان بررسی شود. با بررسی دو سلول به طور موازی ، اکنون فقط خطر ناچیز تشخیص اشتباه وجود دارد. بنابراین والدین می توانند در چنین حالتی به تشخیص اعتماد کنند. هیبریداسیون درجا به هر زن بارداری ارائه نمی شود ، بلکه فقط به زنان از یک گروه خطر ارائه می شود. با این وجود ، زنان باردار به درخواست خود از این نوع تشخیص محروم نیستند. غیر طبیعی سونوگرافی یافته ها یا سرم غیرطبیعی ممکن است یک پزشک را وادار به ارائه روش تشخیصی کند. امروزه می توان از هیبریداسیون درجا برای تشخیص بخش زیادی از انحرافات کروموزومی استفاده کرد ، اما به هیچ وجه همه آنها نیست. بنابراین ، هیبریداسیون درجا هرگز نباید به تنهایی انجام شود ، بلکه باید همیشه همراه با آزمایش کروموزوم معمولی مورد استفاده قرار گیرد. مراقبت از زن باردار نقش اصلی را در این روش دارد. بنابراین ، قبل از تجزیه و تحلیل ، یک بحث کامل در مورد روش تشخیصی با مادر باردار انجام می شود و او را در مورد خطرات ، احتمالات و محدودیت های این روش آگاه می کند.
